HBL100人整合SV40基因的乳腺上皮细胞

细胞名称 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞

细胞别称 HBL-100; HBL 100; HBL100

细胞货号 SNL-012

细胞种属 人

生长情况 贴壁

培养条件 1640+10%FBS+1%双抗

培养环境 air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、细胞培养操作

换液周期 2-3天

培养基体积 T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

传代比例 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；

4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；

6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间

消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、细胞冻存操作

冻存液配方 92%FBS+8%DMSO(新手建议)或92%完全培养基+8%DMSO(高手建议);

冻存规格 200-300万/ml，1ml每管

冻存方法 1. 离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；

2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

3. 将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

注意事项 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活xing，若有异常，及时调整实验方案

Tips：

1.细胞贴壁较弱，发货易漂浮成团，消化时间偏短，注意控制消化时间并避免细胞成团；

2.细胞密度较高，培养基营养不足时细胞易脱落，注意不要长时间高密度培养；

3.细胞在室温放置太久易成片脱落漂浮，也不要使用太冷的培养基和PBS处理细胞；