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1.工艺布局设计
该GMP实验室位于建筑物的四层，净化面积700平方米，土建层高5.0米，实验室吊顶净高2.7米。在该净化区域内将建造四个实验室，以供研制四种不同类型的药品，在其中一套实验室内还包含一间4℃的保鲜冷库，且四间实验室在使用时间于周期上有所差异。为此首先对工艺布局上进行合理的布置(见图1)：房间的中间为洁净走廊，其东西两侧分别布置两套实验室，在西侧实验室的北端布置了共用净化辅助房间，在东侧实验室的北端布置了产品出口及专用电梯，在实验室的最西侧布置了一条参观走廊并兼做非净化物流的通道。这样进入实验室的工作人员须先经过共用区域的净化辅助房间，经过人身的净化或消毒处理后，才能再分别进入各自的实验室，即：工作人员一换鞋一男(女)一更一缓冲一换鞋一男(女)二更一消毒一缓冲一洁净走廊一实验室。实验完成后工作人员原路返回。物料则经外走廊一预处理一消毒一物流吹淋室一缓冲一洁净走廊一传递窗一实验室一洁净走廊一洁净室药品专用电梯一室外。参观(外)走廊与实验室、洁净走廊与实验室之间在相对应的位置上设置圆弧形铝型材密闭观察窗，使参观者不必进人实验室，通过参观走廊上的观察窗就可以清楚地看到实验室里面工作的情况。这样的工艺布局不仅可以保证各实验室操作的独立性，不发生相互妨碍的情况，而且可以使人群、物流各行其道，较大限度地避免了交叉污染。
细胞制备质量控制--无菌试验
每批培养的细胞在患者输注前均应进行无菌试验。建议在培养开始后3～4d起每间隔一定时间取培养液样品，包括患者回输前48h取样，按现行版《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
在患者使用前，取培养液及/或沉淀物用丫啶橙染色或革兰染色，追加一次污染检测。进行长期培养的细胞，应进行支原体检查。对每一批细胞终制剂应留样检测。如果留样发现阳性结果，应及时对生产过程进行检查。如果在细胞制备的早期发现有污染的情况，应终止该批细胞制品的继续制备。细胞制备实验室应具有自体DC-CIK 细胞制备及检定过程的原始记录和检定报告，并永久保存。
一、DC-CIK细胞培养方法
1.将采集的外周血收集到2支离心管中，2000r/min离心5min，弃上清，将沉淀细胞混合，到加生理盐水至25mL，使沉淀细胞充分悬浮。另取1支离心管，加入淋巴细胞分离液20mL，用滴管将血细胞悬液缓慢转移至淋巴细胞分离液的表面，使二者之间形成清晰的界面。
2.2000r/min离心20min后，从管底到液面分为4层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、外周血单个核细胞层（PBMC层）、血浆层。用吸管将PBMC层吸出，转移至另一支离心管中。
3.加生理盐水至40mL，1500r/min离心5min，结束后弃上清，将沉淀细胞悬浮，加入生理盐水至40mL，充分混匀后，1500r/min离心5min。如此共离心洗涤3次。
4.最后一次离心结束后，弃上清，将沉淀细胞均分为3份，分别转移到3个培养瓶中，各加入40mL的免疫细胞无血清培养液培养，分别记为A1、A2、A3。
5.2h后取出培养的细胞，分别将A1、A2和A3中悬浮的淋巴细胞转移至另3个培养瓶中，分别记为B1、B2、B3。3个B瓶中加入IFN-γ，第二天加入IC因子（含有IL-2和抗CD3单抗），诱导培养CIK；3个含有贴壁细胞的A瓶中各加入40mL的免疫细胞无血清培养液和H1、Hb因子，诱导培养DC。
6.DC培养过程中，如有发黄，则换液，补加H1和Hb因子。
7.CIK培养过程中，如发现培养液发黄，则换液，换液后补加IL-2。如发现有细胞团块结为不良絮状，则用离心管收集后静置沉降5min左右，待絮状物沉淀后，小心将上清细胞悬液倒回培养瓶中。
8.DC于第7天加入肿瘤抗原和TNF，第8天铲下收集后与相应的CIK混合共培养。DC瓶弃去。如果总的细胞量过于庞大，也可将DC和CIK混合后均分到A和B瓶中。
9.共培养的DC-CIK于第10天做微生物检测。
10.细胞悬浮液的制备：培养结束后，将培养瓶中的细胞悬液用离心管收集，1500r/min，5min离心洗涤3次，将25毫升白蛋白加入250ml盐水中，终浓度1%，加入细胞沉淀，配成细胞悬液。
