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一、CIK细胞的制备方法
1.由医护人员抽取患者外周血50-60ml，将其收集于肝素瓶中，37℃室温存放即可；
2.在超净台上使用2支50ml离心管分别装入20ml的淋巴分离液；
3.按30ml/支病人外周血用毛玻璃吸管转移至装有淋巴细胞分离液的离心管中(注意外周血需要放在淋巴细胞上层)；
4.20℃、800g、离心15min；
5.离心结束后使用负压器将离心管中的血浆尽可能多的吸除，将所得的淋巴细胞层细胞转移至另一只50ml离心管中；
6.按照500ml生理盐水配8万单位庆大霉素的剂量，将160IU/ml的庆大霉素生理盐水溶液加入到50ml离心管中充分混合均匀后，20℃、1800-2000r/min、离心8分钟，结束后洗涤1至2次；
7.离心和洗涤均完成后，弃上清再将其移至175cm2的培养瓶中在饱和湿度37℃、5.0%二氧化碳培环境中培养24小时；
8.培养完成后加入1ml的CIK细胞混合因子最终浓度为50～100ng/ml Anti-human CD3、50～1000IU/ml IL-2、0.5～1ng/ml IL-1α然后继续放置在饱和湿度37℃、5.0%二氧化碳培环境中培养；
9.培养到第五天时，观察细胞的生长状态，将CIK细胞传代支2个175cm2培养瓶中每瓶容量125ml放置在饱和湿度37℃、5.0%二氧化碳环境中培养；
10.培养至第七到第八天时，观察细胞生长状态，由2个175cm2传代扩增培养至4-6个175cm2培养瓶中继续培养；
11.培养至第九到第十天时，观察细胞生长状态继续传代培养扩增为12瓶；
12.培养至第十一到第十二天时，观察细胞生长状态，随即取样抽取1ml细胞培养液置于15ml离心管中送检，然后继续传代扩增至24瓶，详细记录信息后送去做细菌检测；
13.培养至第十四到第十五天时，了解检验结果是否符合要求，观察细胞生长状态后，随即取样5ml培养液做细胞活数统计并进行内毒素检测。如果检测结果符合标准收集24瓶CIK细胞至50ml离心杯中，室温、2500r/min、离心8分钟；
14.离心结束后弃上清，将细胞收集到4支50ml离心管中，用0.9%生理盐水平衡离心管2000r/min离心8min清洗收集；
15.离心结束后弃上清，将细胞集中到2支50ml离心管中使用0.9%生理盐水平衡离心管继续2000r/min、8min离心；
16.最终将收集的细胞置于100ml0.9%的生理盐水中，抽取5ml20%人血蛋白加入到细胞悬液中。抽取1ml细胞悬液支玻璃安瓿做好记录和标记置于-4℃存放3个月用以备查。
树突状细胞(Dendritic cells，DC)是专职抗原提呈细胞, DC是激发B和T淋巴细胞介导的免疫反应的重要的高效专职抗原提呈细胞。DC能活跃地摄取一系列不同的抗原物质，并进行加工和装载到MHCI和II类分子上。
CIK细胞瞄准白血病细胞，需要人体内另一种细胞树突状细胞(DC)的指导。树突状细胞能识别处理白血病细胞，并把白血病细胞的相关信号传递给CIK细胞，使CIK细胞专门杀伤白血病细胞。所以，树突状细胞能显著提高CIK细胞针对白血病细胞的杀伤活性。白血病患者受本身疾病和化疗的影响，其树突状细胞识别处理白血病细胞的功能受到很大影响。为了恢复和提高树突状细胞的功能，指导CIK细胞杀伤白血病细胞，体外DC-CIK细胞联合培养技术应运而生。
CIK细胞(cytokine-inducedkiller)是一种有效杀伤白血病细胞的免疫活性细胞.在体外条件下，人体外周血某些单个核细胞经过多种细胞因子(如IFN-γ,IL-1,IL-2,anti-CD3mAb)的共同刺激后诱导成CIK细胞，其主要效应细胞表面既有T细胞的表面标志(TCR-α/β，CD3)，也有NK细胞的表面标志(CD56)。
过去过继免疫治疗所使用过的淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine-activatedkiller,LAK)和肿瘤浸润淋巴细胞(tum-infiltratinglymphocytes,TIL)相比，CIK具有更强的细胞增殖能力和更强的抗白血病细胞作用，且毒副作用很小，可以满足过继免疫治疗中对效应细胞的要求。细胞治疗可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下，直接杀伤白血病细胞，并且调节和增强机体的免疫功能。
