人可溶程序死亡因子(sPD-1)ELISA试剂盒操作步骤
1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入 大量的气泡,产生加样上的误差。
2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔 建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用 标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加 入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸待删除信息洗涤,洗涤次数增加一次。
5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸待删除信息洗涤,洗涤次数增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9)在450nm波长处测定各孔的OD值。
【注意事项】
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开 封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果 。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确,以避免试验误差。一次加样 时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样 本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后 再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次使用,以避免交叉污染。
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